Chromatographia liquida principalis est methodus probandi argumenta cuiusque componentis et immunditiae in materiis rudibus, intermediis, praeparationibus et sarcinarum materiarum, sed multae substantiae non habent modulos modos inniti, unde necesse est novas methodos evolvere. In evolutione methodi liquidae periodi, columna chromatographica est nucleus liquidae chromatographiae, unde ad eligendum idoneum columnae chromatographicae pendet. In hoc articulo auctor explicabit quomodo eligat columnam liquidam chromatographiam ex tribus aspectibus: altiore notione, consideratione et applicatione scopo.
A.Overall notiones ad liquidum chromatographiam columnas eligens
1. Censeo proprietates physicas et chemicae analyti: ut structuram chemicam, solubilitatem, stabilitatem (qualem an facile sit oxidized/reduci/hydrolyzed), acorem et alcalinitatem, etc. factor in determinandis proprietatibus, sicut coetus conjugatus validam habet effusio ultraviolacam et validam fluorescentiam;
2. Determinare propositum analyseos: an alta separatio, alta columna efficientia, brevis analysis tempus, summus sensus, princeps pressura resistentia, vita longa columna, humilis sumptus, etc.
- Aptam columnam chromatographicam elige: intellege compositionem, proprietates physicae et chemicae chromatographicae filli, quales sunt particulae magnitudo, magnitudo porum, tolerantia temperatura, pH tolerantia, adsorptionem analyti, etc.
- Considerationes ad eligendum umorem fina columnarum
Hoc caput de factoribus considerandis tractabit, cum chromatographiam columnam eligens ex prospectu physicae et chemica proprietatum ipsius columnae chromatographiae. 2.1 Filler matrix
2.1.1 Silica matrix gel matrix filler matrix maxime liquidae columnae chromatographiae est gel silica. Hoc genus filler habet puritatem altam, humilis sumptus, altas vires mechanicas, et facile est coetus mutare (ut phenyl compagem, amino compagem, cyano compagem, etc.), sed pH valoris et temperaturae extensionem illam tolerat limitata; pH ambitus maxime filorum silicarum gel matricis est 2 ad 8, sed pH amplitudines globorum silicarum specialiter modificatarum globorum nexarum tam latae esse possunt quam 1.5 ad 10, et sunt etiam peculiares gradus silicae gel nexae, quae stabilia sunt ad pH humilem; ut Agilent ZORBAX RRHD stabulum-C18, quod stabile est ad pH 1 ad 8; temperatura superior limitatio matricis silicae geliorum fere 60℃ , et nonnullae columnae chromatographiae temperiem 40℃ ad altam pH tolerare possunt.
2.1.2 Polymer matrix Polymerus fillers plerumque polystyrene-divinylbenzene vel polymethacrylata. Eorum commoda sunt ut latitudinem pH tolerare possint – adhiberi possunt in latitudine 1 ad 14 et magis resistunt calidis temperaturis (supra 80 °C attingere possunt). Comparatus cum fillers silica fundato C18, hoc genus filler hydrophobicitatem validiorem habet, et polymerus macroporosus valde efficax est in separandis exemplis sicut in proteinis. Incommoda eius sunt quod efficientia columna inferior et vis mechanica debilior est quam fillers silica-substructio. 2.2 figura particula
Pleraque moderna HPC fillers sunt particulae sphaericae, interdum vero sunt particulae irregulares. Particulae sphaericae inferiores columnae pressuram, columnae superiores efficientiam, stabilitatem et vitam longiorem praebere possunt; cum utens summus viscositas augmenta mobilia (ut acidum phosphoricum) vel cum solutione exempli viscosa est, particulae irregulares ampliorem superficiei specificam habent, quae magis ad plenam actionem duorum augmentorum et pretium relative humilis est. 2.3 particula magnitudinis
Quo minor magnitudo, superior columnae efficacia et superior separatio, gravior autem pressionis altior resistentia. In communissimo usu columna est 5 µm particula columnae magnitudo; si separatio postulationis alta est, a 1.5-3 µm filler eligi potest, quae ad problema separationis alicuius matricis et multi-componentis exempla solvendum confert. UPLC uti potest 1.5 µm fillers; 10 µm vel particulae majoris magnitudinis fillers saepe pro columnis semi-praeparativo vel praeparativo adhibentur. 2.4 Carbon content
Contentum carbonis refertur ad proportionem Phase religatae in superficie gel silicae, quae ad specifica aream superficiei refertur et periodo conjuncta coverage. Altus carbonis contentus altam columnam capacitatem et resolutionem altam praebet, et saepe ad exempla composita quae altam separationem requirunt, sed propter longum commercium temporis inter duas partes, tempus analysi longum est; humilis contentum carbonis chromatographicae columnae breviorem tempus analysim habent et selectivitates varias ostendere possunt, et saepe adhibentur ad exemplaria simplicia quae celeri analysi requirunt et exemplaria quae altas condiciones aqueas periodi requirunt. Fere, contentum carbonis C18 iugis ab 7% ad 19%. Pore 2.5 magnitudine et superficiei specifica
HLP adsorptionis instrumentorum raritates sunt, et maxime interactiones fiunt in poris. Moleculae igitur poros adsorbindos et separandos ingredi debent.
Magnitudo porum et superficiei specificae sunt duae notiones complementariae. Magnitudo porum parva significat magnam superficiem specificam, et vice versa. Magna specifica area superficiei potest augere commercium inter moleculas et augmenta conjuncta, augere retentionem, augere capacitatem sample loading ac columnae, ac separatio complexorum. Filtrae porosae plene ad hoc genus fillerorum pertinent. Pro iis, quae ad magnas separationes requiruntur, commendatur eligere fillers cum ampla superficiei specifica; parva superficiei specificae potest reducere pressionem, columnam efficientiam meliorem, et tempus aequilibrium reducere, quod analysi gradienti aptum est. Cori putamen fillers ad hoc genus fillers pertinent. Praemissa ad separationem praestandam, commendatur eligere fillers cum parvis superficiei specificae pro iis, quae cum magna analysis efficientiae requiruntur. 2.6 Pore volumen et robur mechanicum
Pore volumen, quod "volumen pororum" appellatum est, ad magnitudinem voluminis vacui per particulam unitatis refertur. Potest bene reflectere mechanicas vires filli. Robur mechanica implentium cum magno volumine poro paulo infirmior est quam quae fillers parvo volumine poro. Filtrae cum volumine poro minus quam vel ad 1.5 mL/g, plerumque ad HPLC separationem adhibentur, cum globuli pororum voluminis maior quam 1.5 mL/g adhibentur maxime ad chromatographiam hypotheticam exclusionis et chromatographiae humilis pressuris. 2.7 Capping rate
Capping apices tendentes reducere potest ex commercio compositorum et expositorum coetuum silanolorum (qualia sunt compages ionica inter compositiones alcalina et catervas silanoles, copias van der Waals et vincula hydrogenii inter compositiones acidicas et coetus silanolos), ita ut columnae efficientiam et apicem figurae augeant. . Gradus incapax conjuncta generabunt varias selectivitates relativa ad incrementa capped coniuncta, praesertim ad exemplaria polaria.
- Applicationem harum alia liquida columnae fina
Hoc caput applicationis ambitum diversarum figurarum liquidarum columnarum per quosdam casus describet.
3.1 Reverse-phase C18 chromatographica columna
Columna C18 communissime adhibita est columna Phase-versa, quae occurrere potest argumentis et immunditiis probatis substantiarum maxime organicarum, et applicatur substantiis mediae polaris, infirmis polaris et non polaris. Genus et specificatio columnae chromatographicae C18 eligendae sunt secundum exigentias separationis specificas. Exempli gratia, pro substantiis separatis magnis requisitis, 5 µm*4.6 mm* 250 mm specificationibus saepe adhibentur; pro substantiis cum complexu separationis matrices et similium verticitatis, 4 µm*4.6 mm* 250 mm specificationes seu particulae minores magnitudinum adhiberi possunt. Exempli causa, auctor usus est 3 µm*4.6 mm* 250 mm columnae ad deprehendendas duas immunditias genotoxicas in celecoxib API. Separatio duarum substantiarum attingere potest 2.9, quod est optimum. Praeterea sub praemissa separationis efficiendae, si celeri analysis requiritur, brevis columna 10 mm vel 15 mm saepe seligitur. Exempli gratia, cum auctor usus LC-MS/MS ad turpitudinem genotoxicam in piperaquino phosphate API deprehendere, a 3 µm*2.1 mm*100 mm columna adhibita est. Separatio inter immunditiam et praecipuam partem 2.0 fuit, et detectio exempli per 5 minutas absolvi potest. 3.2 Reverse-phase phenyl column
Phenyl columnae genus est etiam columnae paschalis inversae. Hoc genus columnae validam habet selectivam compositionum aromaticorum. Si responsio compositorum aromaticorum mensurata est infirma columna ordinaria C18, potes considerare reponendam columnae phenyl. Exempli gratia, cum celecoxib API faciebam, principale responsionis pars phenyl columnae ejusdem fabricae eademque specificatione mensurata (totus 5 µm*4.6 mm*250 mm) erat circiter 7 temporibus columnae C18. 3.3 Normal-phase columnae
Ut supplementum efficax ad columnae phase adversae, columna normale phase apta est ad compositiones maxime polares. Si apicem adhuc velocissimum est cum plus quam 90% aqueo Phase in aversa-phase columnae eluentis, et etiam prope et cum solvendo cacumine obumbrat, considerare potes reponere in columna normali phase. Hoc genus columnae includit hilic columnam, amino columnam, cyano columnam, etc.
3.3.1 Hilic columna Hilica plerumque in circulos hydrophilicas involvit catenam alkyl compaginatam ad augendam responsionem substantiis polaris. Hoc genus columnae analysi saccharo substantiis apta est. Hoc genus columnae auctor usus est, cum faceret contenta et cognata substantias xylosae et derivationes. Isomers derivati xylost etiam bene separari potest;
3.3.2 Amino columna et cyano columna Amino columna et cyano columna referuntur ad introductionem modificationum amino et cyano in fine catenae iunctae alkyl, respective ad meliorem selectivam substantias speciales: exempli gratia, amino columna est bona electio. ad separationem sacchari, amino acida, bases et amidi; cyano columna meliorem selectionem habet, cum structuras hydrogenatas et nonhydrogenas separans similes substantias ob praesentiam vinculorum coniugatorum. Columna Amino et columna cyano saepe permutari possunt inter columnam normalem et periodum columnae adversae, sed frequentes commutationes non commendantur. 3.4 Columna Chiral
Columna chiralis, ut nomen sonat, apta est ad separationem et analysim compositorum chiralium, praesertim in campo pharmaceutico. Hoc genus columnae considerari potest cum institutio adversa periodus et normalis Phase columnae separationem isomers consequi non possunt. Exempli gratia, auctor usus est 5 µm*4.6 mm* 250 mm columnae chiralis ad duos isomos 1,2-diphenylethylenediaminum separandos: (1S, 2S)-1, 2-diphenylethylenediaminum et (1R, 2R)-1, 2 -diphenylethylenediaminum et separatio inter utrumque circiter 2.0 pervenit. Sed chiralae columnae pretiosiores sunt quam alia genera columnarum, plerumque 1W+/ fragmentum. Si opus est talibus columnis, unitas praevisionem sufficientem facere debet. 3.5 Ion columna commutationem
Ion columnae commutationis aptae sunt separationi et analysi ionum accusatarum, ut iones, servo, acida nucleica et substantiae saccharo nonnullae. Secundum genus fills, sunt in columnas commutationis cationem dividuntur, anion columnas permutant, et fortia catio columnarum permutant.
Cation permutationis columnarum calcium fundatum et hydrogenii substructum columnas comprehendunt, quae maxime aptae sunt ad analysin substantiarum cationicarum sicut amino acida. Exempli gratia, auctor calcium-substructio columnarum usus est cum calcium gluconatum et calcium acetatis in solutione rutilante resolvendo. Ambae substantiae ad λ=210nm responsa valida habuerunt, et gradus separatio ad 3.0; auctor usus est hydrogenii columnis substructis cum substantias glucoses relatas resolvere. Plures substantiae maiores cognatae — maltosae, maltotriosae et fructose — sensitivum altum sub detectoribus differentialibus habuerunt, cum deprehensione limitis tam humilis quam 0.5 ppm et gradus separationis 2.0-2.5.
Anion columnae commutationis maxime aptae sunt analysi substantiarum anionicarum ut acida organica et halogen iones; fortis catio permutationis columnarum altiorem candum commutationem capacitatis et selectivity habent, et aptae sunt ad exempla separationis et analysi complexorum.
Hoc modo praefatum est introductio ad rationes et applicationes variarum corporum liquidarum chromatographiae communis aliquot columnarum cum propria experientia auctoris coniunctarum. Aliae speciales species columnarum chromatographicarum in applicationibus actualibus sunt, sicut columnae chromatographicae magnae-poriae, parvae columnae chromatographicae, affinitatis columnae chromatographiae, multimodi chromatographicae columnae, chromatographiae liquidae columnae ultra-altae (UHPLC), columnae chromatographiae fluidae supercriticae. SFC) etc. Magnam partem in diversis campis ludunt. Genus chromatographicae columnae specificae seligi debet secundum structuram et proprietates exempli, separationis ac aliorum emissionum requisita.
Post tempus: Iun-14-2024